PT全波長酶標儀是一款集紫外可見光吸收、熒光、化學發(fā)光等多種檢測模式于一體的高精度分析儀器,廣泛應用于生命科學、臨床診斷、藥物研發(fā)及食品安全等領域。
該儀器具備寬波長覆蓋能力,通常可檢測1901000nm范圍內的光信號,滿足不同物質的特征吸收檢測需求,如核酸在260nm、蛋白質在280nm處的特征吸收,以及ELISA實驗中450nm、630nm等波長的讀數。其采用高品質光柵單色器技術,波長精度可達±1nm以內,帶寬可調,有效減少雜散光干擾,提高檢測特異性。同時,配備高靈敏度探測器,如光電倍增管(PMT)或CCD陣列檢測器,能捕捉微弱光信號,檢測下限可達pg級,滿足微量樣品分析需求。
1、操作前準備
確保待檢測樣品(如ELISA板、核酸溶液、細胞懸液等)已按實驗方案處理完畢,且微孔板內無氣泡、液滴掛壁。若有氣泡,可輕輕敲擊板壁去除;掛壁液滴需用紙巾吸干邊緣。
準備空白對照、標準品、質控品,按預設布局排列在微孔板中(建議記錄孔位布局,避免混淆)。
確認酶標儀電源線連接正常,開機前檢查樣品室是否清潔(無灰塵、液體殘留),必要時用無塵布擦拭。若實驗需溫控(如37℃孵育)或震蕩,提前確認儀器相關功能正常(如溫控模塊是否能達到設定溫度)。
打開電腦及酶標儀電源,啟動配套操作軟件,等待儀器自檢完成(通常顯示“就緒”狀態(tài))。
2、放置酶標板
儀器自檢后,酶標板托架會自動伸出,注意儀器前部不要放置物品,以免影響托架的伸出。
將酶標板按數字正確的方向放在托架上。點擊儀器下部最右側的“move plate in”圖標,酶標板將自動進入儀器中,注意不要用手動推入。
3、設置檢測參數
根據實驗類型在軟件中選擇對應的檢測模式,并設置檢測波長、帶寬等參數。對于吸收光檢測(如ELISA、核酸定量),需設置檢測波長和帶寬;對于熒光檢測,需設置激發(fā)波長、發(fā)射波長,并選擇頂部/底部讀數;對于化學發(fā)光檢測,無需設置波長,直接選擇“化學發(fā)光”模式,注意關閉樣品室光源以減少干擾;對于動力學檢測,需額外設置檢測時間間隔、總檢測時長,并開啟溫控(若需恒溫反應)。
選擇微孔板規(guī)格(如96孔板、384孔板),并定義檢測范圍(如“全板檢測”或指定特定孔位,如A1H12)。若需排除邊緣效應或部分孔位,可在軟件中標記“不檢測”孔。
若反應需恒溫(如酶促反應在37℃),設置目標溫度(誤差通常±0.1℃),并等待儀器預熱至設定溫度。若檢測前需混勻樣品,設置震蕩模式(如線性震蕩)、轉速(如500rpm)和時間(如10秒)。對于吸收光檢測,可開啟“雙波長檢測”,通過參比波長扣除背景干擾(如微孔板劃痕、氣泡),提高數據準確性。
4、開始測量
在屏幕上選“Start measurement”,點擊綠色箭頭。
在“Select a File”窗口左上角選“Obtain Raw Date”,然后點擊綠色箭頭。
在“plate”欄中的“plate definition”下拉條中,對板的類型進行選擇,如平底透明板等。
在“Wavelength”欄中“Measurement”項輸入測定波長值;如需扣除背景波長,則在“Reference”項選中并輸入背景波長值。
在“Part of plate”欄中,用鼠標左鍵拉框選擇要測定的樣品孔(使待測定的樣品孔變?yōu)辄S色),注意待測孔只可橫向或縱向連續(xù)選擇,不可以被間斷。
點擊綠色箭頭,儀器開始自動測定。
5、記錄與分析
根據需要,定期記錄反應后的光學密度,并將其轉換為反應速率。通過比較不同實驗的結果,可以評估反應條件和影響反應速率的因素。
